Einfluss der Lagerung von kaninem konservierten Vollblut auf die Aktivität von plasmatischer Gerinnung, natürlichen Gerinnungsinhibitoren und Fibrinolyse unter Berücksichtigung zweier Konservierungsmedien

Jan Gundermann (Autor)

Buch | Softcover

188 Seiten

2025
VVB Laufersweiler Verlag
978-3-8359-7260-5 (ISBN)

Infos

Die tiermedizinische Literatur zur Aktivität bzw. zum Gehalt von hämostatisch aktiven Proteinen im Plasmaanteil von kühl gelagerten Vollblutkonserven ist unzureichend, um Empfehlungen hinsichtlich des klinischen Einsatzes dieser Blutproduktkomponente als Ersatz für Plasmaprodukte zu geben. Ebenso ist unklar, ob es hämostatisch äquivalent zu frischem Vollblut ist. Insbesondere Proteine der Fibrinolyse wurden hierbei bisher nicht betrachtet. Auch fehlt die Betrachtung bei Einsatz unterschiedlicher Antikoagulanzien/Additivlösungen, was aufgrund der in der Veterinärmedizin bekannten Einflüsse auf die zellulären Bestandteile des Vollblutes und der in der Humanmedizin nachgewiesenen Veränderungen im Plasma von Interesse ist. Aus diesem Grund sollte die vorliegende Arbeit den Einfluss der Lagerungsdauer auf Aktivitäten bzw. Gehalte der prokoagulatorischen und antikoagulatorischen Faktoren bzw. Fibrinolysemarker des Plasmaanteils von Vollblutkonserven während einer 28-tägigen Lagerung bei 4 °C untersuchen. Darüber hinaus sollte der Einfluss zweier Antikoagulantien/Additivlösungen (Citrat-Phosphat-Dextrose (CPD)/Phosphat, Adenin, Glukose, Guanosin, Kochsalzlösung und Mannitol (PAGGS-M) auf die hämostatisch aktiven Proteine betrachten werden. Die Hypothese bezüglich der Lagerungsdauer war, dass der Gehalt bzw. die Aktivität der hämostatisch aktiven Proteine an Tag fünfzehn der Lagerung über oder gleich fünfzig Prozent des Ausgangswertes liegen sollte. Darüber hinaus wurde von einem fehlenden signifikanten Unterschied der Gehalte bzw. Aktivitäten zwischen den unterschiedlich antikoagulierten/konservierten Konserven ausgegangen. Mit einer Ausnahme wurde hier bei Faktor V gerechnet. Die für die Untersuchungen benötigten Blutprodukte wurden während eines vorherigen, vom Regierungspräsidium genehmigten Dissertationsprojektes (V 54 - 19 c 20 15 h 02 GI 18/17 kTV 16/2020) hergestellt. Hierzu wurden 21 Hunde aus dem Blutspenderpool der Klinik während einer Routineblutspende zwischen dem 13. Januar und 01. März 2021 rekrutiert. Ausgewählt wurden hierbei ausgewachsene Tiere zwischen einem und zehn Jahren, die bei physiologischem Body Condition Score ein Körpergewicht von mehr als 27 kg und einen ruhigen Habitus aufwiesen sowie entsprechend der Empfehlung der zuständigen Kommissionen/Fachgesellschaften geimpft und antiparasitär behandelt waren. Die Tiere wiesen darüber hinaus eine unauffällige Anamnese, klinische Untersuchung und Basislabordiagnostik auf. Trächtige Tiere, Tiere mit die Hämostase beeinflussenden Grunderkrankungen oder Tiere, die in ihrem Leben zuvor Blutprodukte erhalten haben, wurden ausgeschlossen. Auslandsaufenthalte wurden nach Abwägung zugelassen. Den Hunden wurden jeweils ca. 450 ml Blut entnommen und anschließend wurde das Blut von jeweils drei Tieren zu einem Pool kombiniert (220 ml je Tier). Aus den sieben Poolbeuteln wurden anschließend je zweimal fünfzig Milliliter entnommen und in entsprechende Transferbeutel überführt. Einer der Transferbeutel wurde nicht weiterverarbeitet und stellte den Beutel mit CPD (VB) dar. Wohingegen dem anderen Beutel zusätzlich elf Milliliter PAGGS-M zugesetzt wurden (VB-PAGGS). Die Transferbeutel wurden anschließend für 28 Tage bei 4 °C aufrecht gelagert und alle zwei Tage mehrfach geschwenkt. Probenentnahmen zur Gewinnung des Plasmaanteils zu Analysezwecken für die vorliegende Arbeit fanden nach null, einem, drei, fünf, zehn, fünfzehn, 21 und 28 Tagen statt. Aus den zuvor bei -80 °C gelagerten Proben wurden anschließend prokoagulatorische Faktoren (Faktor V (FV), VII (FVII), VIII (FVIII), IX (FIX), X (FX); Fibrinogen (Fib) und Von-Willebrand-Faktor-Antigen (vWF-Ag)), Gerinnungsinhibitoren und Fibrinolysemarker (Antithrombin (AT), Protein C (PC), Protein S (PS), D-Dimere (DDIM)) sowie Gerinnungszeiten (Prothrombinzeit (PT) und aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT)) bestimmt. Verwendet wurde zu diesem Zweck ein automatisiertes Gerinnungsanalysegerät (STA Compact Max 3® Diagnostica Stago S.A.S., Asnières-sur-Seine, France). Wie im Rahmen der Lagerung zu erwarten war, nahm die Aktivität bzw. der Gehalt der hämostatisch aktiven Proteine im Verlauf der Lagerung ab. Hierbei fiel der Mittelwert der Pools aller pro- und antikoagulatorischen Faktoren bis spätestens Tag 28 signifikant (FV, FVIII, vWF-Ag, PC p < 0,0001; FIX p = 0,0001; AT p = 0,0002; PS p = 0,0005; FX p = 0,0012; FVII p = 0,0017; Fib p = 0,0034) ab. Allerdings blieb mit Ausnahme von FVIII und PS, die an Tag fünfzehn 62 bzw. 64 % ihrer Aktivität verloren hatten, bei den anderen hämostatisch aktiven Proteinen mehr als fünfzig Prozent der Ausgangsaktivität bzw. des Gehalts vorhanden. Bis auf PS, bei dem sich zu keinem Zeitpunkt ein signifikanter Unterschied der Aktivität zwischen den VB- und VB-PAGGS-Konserven fand (p = 0,34), zeigten alle anderen Proteine zu mindestens einem Zeitpunkt signifikant niedrigere Aktivitäten (FVII, FIX, FX p < 0,0001; FV p = 0,0002; FVIII p = 0,0016; AT p = 0,0018; PC p = 0,0024; vWF-Ag p = 0,0029; Fib p = 0,013) in den VB-PAGGS-Konserven. Die DDIM zeigten weder über die Zeit (p = 0,44) noch zwischen den Medien (p = 0,22) einen signifikanten Unterschied. Die PT (p < 0,0001) und aPTT (p = 0,018) zeigten einen signifikanten Anstieg über die Zeit sowie die PT signifikant erhöhte Zeiten in den VB-PAGGS-Konserven (p = 0,0046) im Vergleich zu den VB-Konserven. Im Gegensatz dazu fanden sich bei der aPTT (p = 0,064) keine signifikanten Unterschiede zwischen den beiden Zusätzen. Aufgrund der vorliegenden Ergebnisse kann der Plasmaanteil von Vollblutkonserven, die analog zu den in der Studie untersuchten Bedingungen gelagert wurden, als gute Alternative zu anderen Plasmaprodukten eingesetzt werden, insofern das Ziel nicht die Substitution von FVIII oder PS ist. Die Verwendung von VB-PAGGS-Konserven sollte mit Ausnahme des Einsatzes zur Substitution von PS, aufgrund der niedrigeren Aktivitäten bzw. Gehalte der hämostatisch aktiven Proteine zu diesem Zweck vermieden werden. The veterinary scientific literature on the activity/content of hemostatic proteins in the plasma fraction of chilled whole blood is insufficient to make recommendations regarding the clinical use of this blood product component as an alternative for plasma products. It is also unclear whether it is haemostatically equivalent to fresh whole blood. Especially fibrinolytic proteins have not been assessed in this context. Furthermore, the use of different anticoagulant/additive solutions has not been examined. This is of interest due to the known influences on the cellular components of whole blood in veterinary medicine and changes in the hemostatic function of plasma demonstrated in human medicine. For this reason, the present study aimed to investigate the influence of storage time on the activities/content of procoagulatory and anticoagulatory factors and fibrinolysis markers in the plasma content of whole blood units during a 28-day storage period at four degrees Celsius. Additionally, the influence of two anticoagulants/additive solutions (citrate-phosphate-dextrose (CPD)/phosphate, adenine, glucose, guanosine, saline, and mannitol (PAGGS-M) on the hemostatic and fibrinolytic proteins was to be investigated. The hypothesis regarding the storage time was that the content/activity of hemostatic proteins should be equal to or above fifty percent of the initial value on day fifteen of storage. In addition, it was assumed that there is no significant difference in the contents/activities between the differently anticoagulated/preserved whole blood units. Factor V was anticipated to be an expectation regarding a potential difference. The blood products required for the investigations were prepared during a previous dissertation project approved by the Regional Council (V 54 - 19 c 20 15 h 02 GI 18/17 kTV 16/2020). For this purpose, 21 dogs were recruited from the clinic's blood donor pool during a routine blood donation between the 13th of January and the 1st of March 2021. Adult animals between one and ten years of age were selected, which had a body weight of more than 27 kg with a physiological body condition score, calm habitus, and were vaccinated as well as treated with antiparasitic agents following the recommendations of the responsible commissions/specialist societies. The animals also had an unremarkable medical history, clinical examination, and basic laboratory diagnostics. Pregnant animals, animals with underlying diseases affecting hemostasis, or animals that had previously received blood products in their lifetime were excluded. Stays abroad were accepted after consideration. Approximately 450 ml of blood were taken from each dog and then the blood from three animals was combined into a pool (220 ml per dog). Two quantities of fifty millilitres were then sampled from each of the seven pool bags and transferred to corresponding transfer bags. One of the transfer bags was not further processed and represented the bag with CPD (VB). The other bag was spiked with eleven millilitres of PAGGS-M hereafter referred to as VB-PAGGS. The transfer bags were then stored in an upright position at four degrees Celsius for 28 days and inverted several times every two days. Samples were taken to produce the plasma fraction for analysis in the present study after zero, one, three, five, ten, fifteen, 21, and 28 days. Procoagulatory factors (factors V (FV), VII (FVII), VIII (FVIII), IX (FIX), X (FX); fibrinogen (Fib) and von Willebrand factor antigen (vWF-Ag)), coagulation inhibitors and markers of fibrinolysis proteins (antithrombin (AT), protein C (PC), protein S (PS), D-dimers (DDIM)), as well as coagulation times (prothrombin time (PT) and partial thromboplastin time (aPTT)), were determined. An automated coagulation analyzer (STA Compact Max3® Diagnostica Stago S.A.S., Asnières-sur-Seine, France) was used for this purpose. As expected during storage, the activity/content of hemostatic proteins decreased. The pool mean of all pro- and anticoagulatory factors was significantly decreased by day 28 at the latest (FV, FVIII, vWF-Ag, PC p < 0.0001; FIX p = 0.0001; AT p = 0.0002; PS p = 0.0005; FX p = 0.0012; FVII p = 0.0017; Fib p = 0.0034). However, except for FVIII and PS, which had lost 62 % and 64 % of their activity at day fifteen, respectively, the other hemostatic proteins retained more than fifty percent of their initial activity/content. Except for PS, for whom there was no significant difference in activity between the VB- and VB-PAGGS units at any time point (p = 0.34), all other proteins showed significantly lower activities on at least one time point (FVII, FIX, FX p < 0.0001; FV p = 0.0002; FVIII p = 0.0016; AT p = 0.0018; PC p = 0.0024; vWF-Ag p = 0.0029; Fib p = 0.013) in the VB-PAGGS units. The DDIM did not show a significant difference over time (p = 0.44) or between media (p = 0.22). The PT (p < 0.0001) and aPTT (p = 0.018) showed a significant increase over time. The PT showed significantly increased times in the VB-PAGGS (p = 0.0046) versus the VB units in contrast to the aPTT (p = 0.064). Based on the findings of this study, the plasma portion of whole blood units, which were stored according to our study design, can be used as an alternative to other plasma products, as long as substitution of FVIII or PS isn't the indication. Utilization of VB-PAGGS units should be avoided for this purpose, except for PS supplementation, due to the lower activity/content of hemostatic proteins.

Produkt-Details

• Erscheinungsdatum: 28.10.2025
• Reihe/Serie: Edition Scientifique
• Verlagsort: Gießen
• Sprache: deutsch
• Maße: 148 x 210 mm
• Gewicht: 405 g
• Themenwelt: Veterinärmedizin ► Allgemein
• Schlagworte: Antikoagulanzien / Additivlösungen • CPD, PAGGS-M • Gerinnungsfaktoren und Fibrinolyse • Hämostatisch aktive Proteine • Lagerungsdauer • Vollblutkonserven
• ISBN-10: 3-8359-7260-X / 383597260X
• ISBN-13: 978-3-8359-7260-5 / 9783835972605
• Zustand: Neuware