Romeis - Mikroskopische Technik (eBook)

Maria Mulisch, Ulrich Welsch (Herausgeber)

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2015 | 19. Auflage
XVIII, 611 Seiten
Springer Spektrum (Verlag)
978-3-642-55190-1 (ISBN)

Infos

Der ROMEIS ist seit fast 100 Jahren das Standardwerk der mikroskopischen Technik. Über 18 Auflagen hat dieses Methodenbuch die Entwicklung der lichtmikroskopischen Verfahren begleitet und ist bis heute ein unverzichtbares Laborhandbuch für Wissenschaftler und Studierende, die auf den Gebieten der Cytologie, Histologie, mikroskopischen Anatomie, Pathologie und Histochemie forschen. Der Inhalt der 19. Auflage des ROMEIS wurde aktualisiert und um viele moderne Methoden und Anwendungen der Mikroskopie erweitert.

Unter der Herausgeberschaft von Privatdozentin Dr. Maria Mulisch und Professor Dr. med. Ulrich Welsch haben 24 Experten der Mikroskopie aus Forschung und Industrie ihre Erfahrung eingebracht, um dieses Werk zu einem Arbeitsbuch zu machen, auf das man sich beziehen und verlassen kann.

Herausgegeben von:

Dr. habil. Maria Mulisch, geb. 1952 in Braunschweig/Niedersachsen. 1973-1974 Studium der Philosophie in Heidelberg; 1974-1980 Studium der Biologie in Heidelberg; 1983 Promotion; 1993 Habilitation (Zoologie). Seit 2001 Leiterin der Zentralen Mikroskopie im Biologiezentrum der CAU Kiel. Forschungsschwerpunkt: Ultrastruktur pflanzlicher Zellen und Organellen; Arbeitsschwerpunkte: Licht- und elektronenmikroskopische Präparationen, Immunlokalisationen und Analysen an biologischen Proben, Durchführung von Lehrveranstaltungen für Studenten und Kursen für Anwender in den Bereichen Licht- und Elektronenmikroskopie.

Prof. Dr. rer. nat. Dr. med. Ulrich Welsch, derzeit am Institut für Zellbiologie der LMU München, geb. 1940 in Neustadt/Holstein. 1960--1966 Studium der Anglistik und Biologie in München und Kiel; 1974-1981 Studium der Humanmedizin in Kiel; 1983 Approbation. 1984 Vorstand des Lehrstuhls 2 (Cytologie, Histologie, Mikroskopische Anatomie) an der Anatomischen Anstalt der LMU München. Etwa 350 Originalarbeiten, u.a. zu den Themen: Vergleichende Mikroskopische Anatomie der Deuterostomier, mutabiles Bindegewebe der Echinodermen, Morphologie der Gymnophionen, Zellbiologie der Milch und der Milchdrüse. Er ist außerdem Autor des Lehrbuches Histologie, 4. Aufl. 2014.

Mit Beiträgen von:

Dr. Erna Aescht, Linz

Dr. Annegret Bäuerle, Hohenheim

Dr. Rolf T. Borlinghaus, Mannheim

Simone Büchl-Zimmermann, Augsburg

Dr. Anja Burmester, Reinfeld

Dr. Christine Desel, Kiel

Dr. Dennis Eggert, Hamburg

Dr. Christoph Hamers, Düsseldorf 

Dr. Guido Jach, Köln,

Dr. Manfred Kässens, Münster

Prof. Dr. Josef Makovitzky, Heidelberg

Dr. habil. Maria Mulisch, Kiel

Dr. Barbara Nixdorf-Bergweiler, Erlangen

Prof. Dr. Matthias Ochs, Hannover

Detlef Pütz, Düsseldorf

Dr. Rudolph Reimer, Hamburg

Bernd Riedelsheimer, München

Dr. Ulrich Sauer, München

Dr. Heinz Streble, Stuttgart

Dr. Frank van den Boom, Düsseldorf

Dr. Rainer Wegerhoff, Miesbach

Prof, Dr. med. Dr. rer nat. Ulrich Welsch, München

Inhalt

Mitwirkende 5
Benno Romeis (1888–1971) 6
Vorwort zur 19. Auflage 7
Vorwort zur 18. Auflage 8
Inhaltsverzeichnis 10
1. Mikroskopische Verfahren 16
1.1 Lichtmikroskopie 17
Einleitung 17
1.1.1 Die Geschichte des Mikroskops 17
1.1.2 Einführung in die Physik des Lichtes 18
1.1.3 Die Hauptkomponenten des Mikroskops 20
1.1.4 Wie entsteht die Vergrößerung 22
1.1.5 Die Objektive 23
1.1.6 Kondensoren für die Durchlichtmikroskopie 25
1.1.7 Grundsätzliche Einstellungen für die Mikroskopie 25
1.1.8 Die Köhlersche Beleuchtung 26
1.1.9 Kontrastmethoden 27
1.1.10 Relieferzeugende Kontrastmethoden 30
1.1.11 Stereomikroskopie 33
1.1.12 Fluoreszenzmikroskopie 34
1.1.13 Slide-Scanning-Mikroskopie 37
1.1.14 Konfokale Mikroskopie 37
1.1.15 Multiphotonenmikroskopie 39
1.1.16 TIRF 39
1.1.17 Luminiszenzmikroskopie 40
1.1.18 Light-sheet-Fluoreszenzmikroskopie 40
1.2 Elektronenmikroskopie 40
1.2.1 Einleitung 40
1.2.2 Transmissionselektronenmikroskopie 42
1.2.3 Elektronentomografie 47
1.2.4 EFTEM 48
1.2.5 REM und ESEM 49
1.2.6 Präparation für ESEM 55
1.2.7 Rastersondenmikroskopie 56
2. Hochauflösende Mikroskopie 58
2.1 Einleitung 59
2.1.1 Super-Resolution-Mikroskopie 59
2.2 Strukturierte Beleuchtung – SIM 60
2.3 Stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (STORM) 62
2.3.1 Das STORM-Prinzip 63
2.3.2 Farbstoffe für STORM 64
2.3.3 Mehrfarben-STORM 66
2.3.4 3D-STORM 67
2.3.5 Lebendzell-STORM 67
2.3.6 Direkte stochastische optische Rekonstruktionsmikroskopie (dSTORM) 69
2.4 GSDIM: Depletion des Grundzustandes 70
2.4.1 Fluoreszenzzustände 70
2.4.2 Verarmung des Grundzustandes 71
2.4.3 3D-GSDIM 72
2.5 STED – Stimulierte Emissions-Depletion 72
2.5.1 Stimulierte Emission 72
2.5.2 Rastermikroskopie 72
2.5.3 Toroide Fokusformen 73
2.5.4 Die Überschreitung der Auflösungsgrenze 73
2.5.5 Lebendzell-STED-Mikroskopie 73
2.5.6 3D-STED 74
2.5.7 Präparationshinweise 75
2.6 Literatur 76
3. Probengewinnung zur mikroskopischen Untersuchung und Präparation 77
3.1 Abstrichpräparate 78
3.2 Ausstrichpräparate 78
3.2.1 Ausstriche von Zellsuspensionen 78
3.2.2 Organausstriche 80
3.3 Tupf- oder Abklatschpräparate 80
3.4 Isolationspräparate (Zupfpräparate) 80
3.5 Isolation von Zellen 80
3.5.1 Entnahme von adhärenten Zellen aus Zellkulturen 80
3.5.2 Anreicherung von Suspensionszellen 80
3.5.3 Zellsuspensionen von Epithelien 81
3.5.4 Herstellung von zellwandlosen Pflanzenzellen (Protoplasten) 81
3.5.5 Mazerationsmethoden von Zellverbänden 82
3.6 Isolation von Gewebeteilen 82
3.6.1 Biopsie 83
3.6.2 Native Schnitte 83
3.7 Isolation von Zellkompartimenten und Organellen 85
3.8 Trennen und Sortieren von Zellen 85
3.8.1 Durchflusscytometrie 85
3.8.2 Zelltrennung mit Hilfe paramagnetischer Kügelchen (beads) 86
3.9 Lasermikrodissektion 86
3.10 Literatur 90
4. Mikroskopische Untersuchungen von Lebendmaterial 91
4.1 Arbeiten mit Lebendmaterial 92
4.1.1 Voraussetzungen für das Arbeiten mit Lebendpräparaten 92
4.1.2 Präparationsbeispiele für die Herstellung von Lebendpräparaten 92
4.2 Durchführung von physiologischen Versuchen und Vitalfärbung 94
4.2.1 Einteilungen der Vitalfärbung 94
4.2.2 Eigenschaften von Vitalfarbstoffen 94
4.2.3 Vitalfarbstoffe für die Untersuchung in der Hellfeldmikroskopie 95
4.2.4 Nachweis reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) 98
4.3 Literatur 99
4.4 Nachweisquellen und informative Links 99
5. Fixierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie 100
5.1 Theorie der Fixierung 101
5.1.1 Strukturerhaltung 101
5.1.2 Nachweise 101
5.2 Fixierungsverfahren 101
5.2.1 Physikalische Fixierung 101
5.2.2 Chemische Fixierung 102
5.2.3 Fixierungsbedingungen und Anforderungen an die Präparate 106
5.2.4 Praxis der Fixierung für die Lichtmikroskopie 107
5.2.5 Praxis der Fixierung für die Elektronenmikroskopie 108
5.2.6 Beispielhafte Anleitungen 109
5.2.7 Aufbewahrung von fixiertem Material 110
5.2.8 Fixierungs- und Einbettautomaten 111
5.3 Literatur 111
6. Schnittpräparation für die Lichtmikroskopie 112
6.1 Einbettung 113
6.1.1 Allgemeines 113
6.1.2 Auswaschen des Fixierungsmittels aus den Präparaten 113
6.1.3 Entwässern der Präparate 113
6.1.4 Einbringen der Präparate in ein Intermedium (Zwischenflüssigkeit) 115
6.1.5 Durchtränken der Präparate mit dem Einbettmittel 116
6.1.6 Ausgießen (in Blöcke gießen) der Präparate im Einbettmittel 116
6.1.7 Aushärten der Blöcke: 117
6.2 Einbettzubehör 118
6.2.1 Zubehör für die Einbettung von Hand 118
6.2.2 Einbettautomaten 118
6.2.3 Paraffinspender/Ausgießstation 118
6.3 Einbettprotokolle 119
6.3.1 Paraffineinbettung 119
6.3.2 Kunststoffeinbettung 122
6.3.3 Celloidineinbettung 124
6.3.4 Einbettung in Celloidin-Paraffin 126
6.3.5 Agareinbettung 126
6.4 Mikrotome und Mikrotomie 127
6.4.1 Mikrotomtypen 128
6.4.2 Messerarten und deren Anwendungsgebiete 129
6.4.3 Stellung des Mikrotommessers beim Schneiden am Schlitten- und Rotationsmikrotom 130
6.4.4 Schneidetechnik am Mikrotom 131
6.5 Leitfaden zur Beurteilung der Präparation 132
6.5.1 Probleme und Artefakte bei der Schnittpräparation und ihre Abhilfe 132
6.5.2 Beurteilung von Artefakten im Präparat 132
6.6 Literatur 133
7. Präparation für die TEM 134
7.1 Schnittpräparation 135
7.1.1 Fixierung 135
7.1.2 Waschen 135
7.1.3 Entwässern und Einbetten 135
7.1.4 Ultramikrotomie 141
7.2 Kontrastierungstechniken für die Transmissionselektronenmikroskopie (TEM) 149
7.2.1 Einführung 149
7.2.2 Negativkontrastierung 149
7.2.3 Bedampfung 151
7.2.4 Positive Kontrastierungen 152
7.3 Literatur 157
7.3.1 Zusammenfassende Literatur 157
7.3.2 Einzelpublikationen 157
8. Präparation für die konventionelle Rasterelektronenmikroskopie (REM) 158
8.1 Präparate für die REM 159
8.2 Präparationsschritte 159
8.2.1 Reinigung 159
8.2.2 Stabilisierung 160
8.2.3 Freilegen interner Strukturen 160
8.2.4 Abdruckverfahren 161
8.2.5 Trocknung 161
8.2.6 Befestigen der Präparate 162
8.2.7 Sputtern 162
8.2.8 Techniken für stark zerklüftete Objekte oder hohe Auflösung 163
8.2.9 Aufbewahrung der Präparate 164
8.3 Artefakte 164
8.4 Literatur 164
9. Kryotechniken 166
9.1 Einleitung 167
9.2 Kryopräparation für die Lichtmikroskopie 168
9.2.1 Kryostatschnitte 169
9.2.2 Einfrieren der Proben 169
9.3 Kryopräparation für die Elektronenmikroskopie 171
9.3.1 PLT 172
9.3.2 Einfrieren der Proben 172
9.3.3 Gefriersubstitution 176
9.3.4 Gefrierbruch und Gefrierätzung 178
9.3.5 Gefrierschnitte 178
9.4 Kryo-Elektronenmikroskopie 182
9.5 Literatur 183
10. Färbungen 184
10.1 Allgemeines zur Färbung 185
10.2 Farbstoffe 185
10.2.1 Der sichtbare Anteil des Spektrums, Farben und Licht siehe Kapitel 1.1.2 185
10.2.2 Klassifizierung von Farbstoffen 185
10.2.3 Wichtige Farbstoffe 186
10.2.4 Ladung der Farbstoffe 186
10.2.5 Färbevokabular 188
10.2.6 Färbetheorien 189
10.3 Herstellen der Farblösungen 190
10.4 Färbezubehör 190
10.4.1 Färbeküvetten 190
10.4.2 Färbebänke, Tropfflaschen und sonstiges Zubehör 191
10.4.3 Färbeautomaten 191
10.5 Behandlung der Schnitte vor und nach dem Färben 192
10.5.1 Schnittmontage und Trocknung 192
10.5.2 Beschichtungsmöglichkeiten der Objektträger 193
10.5.3 Behandlung der Schnitte unmittelbar vor der Anfärbung 194
10.5.4 Behandlung der Schnitte nach der Färbung 195
10.6 Färbemethoden 199
10.6.1 Kernfarbstoffe und Kernfärbungen 199
10.6.2 Cytoplasmafarbstoffe und Cytoplasmafärbungen 206
10.6.3 Fluoreszenzfarbstoffe 208
10.6.4 Pigmente 208
10.6.5 Basophilie 211
10.6.6 Metachromasie 212
10.6.7 Übersichtsfärbungen 214
10.6.8 Schnellfärbungen 215
10.6.9 Bindegewebefärbungen 216
10.6.10 Stoffnachweise 227
10.6.11 Nachweis von DNA (Desoxyribonucleinsäure) 242
10.6.12 Darstellung von Bakterien, Pilzen, und Protozoen im histologischen Schnitt 244
10.6.13 Darstellung von Blutzellen im histologischen Schnitt 249
10.6.14 Darstellung des Nervengewebes 250
10.6.15 Färbungen an Kunststoffschnitten 268
10.6.16 Stückfärbung 270
10.6.17 Medizinische Cytodiagnostik 270
10.7 Artefakte 281
10.8 Herstellen mikroskopischer Injektions- und Korrosionspräparate 281
10.8.1 Injektionspräparate 282
10.8.2 Korrosionspräparate 284
10.9 Einsatz der Polarisationsmikroskopie für die medizinische Diagnostik 286
10.9.1 Grundlagen der Polarisationsmikroskopie 287
10.9.2 Topo-optische Reaktionen 287
10.10 Literatur 292
10.10.1 Literatur zu Kapitel 10.9 294
11. Fluoreszenzfärbungen 296
11.1 Einführung 297
11.2 Fluorochrome 297
11.2.1 Primärfluoreszenz (Autofluoreszenz) 298
11.2.2 Sekundärfluoreszenz (Fluorochromierung) 300
11.2.3 Mehrfach-Fluorochromierung 300
11.2.4 Anleitungen für einfache Fluoreszenzfärbungen 300
11.2.5 Probleme bei der Fluoreszenzmikroskopie 304
11.3 Live-Cell Imaging 305
11.3.1 Probleme beim Live-Cell Imaging 305
11.3.2 Fluorochrome zum Life-Cell Imaging 306
11.4 Literatur 310
12. Präparationstechniken und Färbungen von speziellen Geweben 312
12.1 Präparation spezieller Gewebe 313
12.1.1 Paraffineinbettung von großen Objekten 313
12.1.2 Bearbeitung (Fixierung, Einbettung und z. T. Färbung) spezieller Organe 313
12.2 Präparation von Hartgewebe für die Histologie 322
12.2.1 Allgemeines 322
12.2.2 Präparationsmöglichkeiten 323
12.2.3 Fixierung von Hartgewebe 323
12.2.4 Entkalkung 324
12.2.5 Kunststoffeinbettung 326
12.2.6 Schliffherstellung ohne Vorbehandlung 327
12.2.7 Mazeration von Skelettteilen 328
12.3 Literatur 328
13. Neuronale Tracer und ihre Anwendungen (Neuronales Tracing) 329
13.1 Retrograde und anterograde Tracer 330
13.1.1 Retrograde Tracer 330
13.1.2 Anterograde Tracer 332
13.1.3 Tracer, die sowohl anterograd als auch retrograd laufen 332
13.1.4 Lösen, Haltbarkeit und Lagerung der Tracersubstanzen 332
13.1.5 Auswahl des Tracers für ein Experiment 332
13.2 Allgemeiner Ablauf eines Versuchs 332
13.3 Techniken zur Tracer-Applikation 332
13.3.1 Kristalline Anwendung 332
13.3.2 Druckapplikation 333
13.3.3 Iontophoretische Injektion 334
13.4 Perfusionskammer für in vitro-Farbstoffapplikationen 336
13.5 Farbstoffapplikationen in der Interface-Kammer 338
13.6 Anwendungsbeispiele für Tracer-Applikationen 340
13.6.1 Fluoro Ruby® (FR) 340
13.6.2 Biotinylierte Dextranamine (BDA) 344
13.6.3 Choleratoxin B (CTB) 346
13.6.4 Phaseolus vulgaris Leucoagglutinin (PHA-L) 347
13.6.5 Biocytin, Neurobiotin 348
13.6.6 Carbocyanine (Lucifer Yellow, DiI, DiO, DiA) 352
13.7 Literatur 353
14. Spezielle Präparationsmethoden für tierische Organsysteme und Gewebe 355
14.1 Einführung 356
14.2 Totalpräparation des Zentralnervensystems (ZNS) von Knochenfischen (Teleostei) 356
14.3 Herstellung chitinhaltiger Präparate – Bleich- und Mazerationsmethode 356
14.4 Totalpräparate kleiner zoologischer Objekte 359
14.5 Darstellung von Knorpel und Knochen kleiner Wirbeltiere 360
14.6 Literatur 361
15. Präparationstechniken und Färbungen von Protozoen und Wirbellosen für die Lichtmikroskopie 362
15.1 Einführung 363
15.2 Besonderheiten der Untersuchung 365
15.2.1 Bedeutung der Lebendbeobachtung 365
15.2.2 Herabsetzen der Beweglichkeit von Mikroorganismen 365
15.2.3 Vital- und Supravitalfärbungen 365
15.2.4 Betäubung 366
15.2.5 Vorfixierung („Räucherungsmethoden“) 366
15.2.6 Fixieren 369
15.2.7 Vorbehandlung von Weich- und Hartsubstanzen 371
15.2.8 Bemerkungen zu den Organismengruppen 372
15.3 Literatur 382
15.3.1 Originalartikel 382
15.3.2 Zusammenfassende Literatur 382
16. Präparationstechniken und Färbungen von Pflanzengewebe für die Lichtmikroskopie 384
16.1 Einführung 385
16.2 Mikroskopische Technik = Mikrotechnik 385
16.2.1 Vorbereitung des Untersuchungsmaterials 385
16.2.2 Wahl des Präparates 385
16.2.3 Fixierung 390
16.2.4 Fixierflüssigkeiten 390
16.3 Weiterverarbeitung des fixierten Materials 391
16.3.1 Konservierung 391
16.3.2 Mazeration 391
16.4 Herstellen von lichtmikroskopischen Präparaten 392
16.4.1 Basismaterialien zur Herstellung mikroskopischer Präparate 392
16.4.2 Schnitttechnik 392
16.4.3 Weiterverarbeitung des Schnittes zu einem lichtmikroskopischen Präparat 393
16.5 Ausgewählte Färbevorschriften 395
16.6 Hämatoxylinlösungen 395
16.7 Einschlussmittel für Dauerpräparate 400
16.7.1 Wasserlösliche Einschlussmedien 401
16.7.2 Wasserunlösliche Einschlussmittel 401
16.8 Literatur 402
17. Cytogenetik 403
17.1 Allgemeines 404
17.2 Chromosomenspreitung 404
17.3 Chromosomenfärbungen 405
17.3.1 Färbung mit Milchsäure-Orcein 405
17.3.2 Q-Bänderung mit Quinacrin 405
17.3.3 Q-Bänderung mit Hoechst 33258 406
17.3.4 Distamycin A/DAPI- (DA/DAPI-)Färbung 406
17.3.5 C-Bänderung mit Giemsa-Färbung 407
17.3.6 G-Bänderung mit Giemsa-Färbung 407
17.4 Fluorochromierung 407
17.5 Histonnachweis 407
17.5.1 Fast Green FCF für Histone 408
17.5.2 Dansylchlorid 408
17.6 Extraktionsmethoden für Nucleinsäuren 408
17.6.1 Säureextraktion 408
17.6.2 Enzymatische Extraktion 409
17.7 Literatur 409
18. Enzymhistochemie 410
18.1 Allgemeines 411
18.1.1 Gewebevorbehandlung 411
18.2 Ausgewählte Methoden von Enzymnachweisen 413
18.2.1 Phosphatasen 413
18.2.2 Carboxylesterhydrolasen 417
18.2.3 Oxidasen, Peroxidasen 419
18.2.4 Dehydrogenasen 420
18.2.5 Transferasen 422
18.2.6 Lyasen 423
18.3 Literatur 423
19. Immunlokalisation 425
19.1 Einführung 426
19.1.1 Grundlagen 426
19.1.2 Aufbau und Eigenschaften von Antikörpern 426
19.2 Herkunft, Auswahl, Überprüfung und Reinigung von Antikörpern 427
19.2.1 Herstellung von Antikörpern 427
19.2.2 Reinigung von Antikörpern 430
19.2.3 Antikörperkonzentrationen 431
19.2.4 Lagerung von Antikörpern 431
19.3 Nachweismethoden und Detektion 431
19.3.1 Direkte und indirekte Immunmarkierung 431
19.3.2 Auswahl der Antikörper 432
19.3.3 Indirekte Immunmarkierung über Protein A 432
19.3.4 Die (Strept-)Avidin-Biotin-(ABC-)Technik 433
19.3.5 Lokalisation mehrerer Antigene 433
19.3.6 Detektion 434
19.4 Anforderungen an die Präparate 439
19.4.1 Whole mount-Immunmarkierung und preembedding-Verfahren 439
19.4.2 Markierung an Schnitten 439
19.4.3 Durchführung der Immunmarkierung 440
19.5 Kontrollen und Problembehandlung 443
19.5.1 Positiv- und Negativkontrollen 443
19.5.2 Antigendemaskierung 443
19.6 Lokalisation von Molekülen mit Hilfe Antikörper-ähnlicher Nachweissysteme 445
19.7 Ausgewählte Anleitungen 445
19.7.1 Affinitätsreinigung von Antikörpern 446
19.7.2 Antigendemaskierung 446
19.7.3 Antigendemaskierung für die Immunelektronenmikroskopie 448
19.7.4 Immunhistologische Markierungen 448
19.7.5 Immunmarkierungen für die Elektronenmikroskopie 449
19.7.6 Immunmarkierungen für Licht- und Elektronenmikroskopie 450
19.7.7 Silberverstärkung 450
19.8 Literatur 451
19.8.1 Originalartikel 451
19.8.2 Zusammenfassende Literatur 451
20. in situ-Hybridisierung 452
20.1 Einleitung 453
20.1.1 Prinzip 453
20.1.2 DNA:DNA-in situ-Hybridisierung 454
20.1.3 RNA:RNA-in situ-Hybridisierung 456
20.2 Sonden 456
20.2.1 DNA-Sonden 457
20.2.2 RNA-Sonden 458
20.2.3 Sonden für Bakterien- oder Virussequenzen 459
20.3 Markierung der Sonden 459
20.4 Anforderungen an die Präparate 459
20.5 Präparation von Chromosomen und Zellkernen 460
20.6 Vorbehandlung der Präparate 460
20.7 Denaturierung der Nucleinsäuren 461
20.8 Hybridisierung 461
20.8.1 Spezifität der Hybridisierung 461
20.8.2 Stringenz 461
20.8.3 Verminderung von unspezifischer Hintergrundmarkierung 461
20.8.4 Hybridisierungskinetik 462
20.8.5 Kontrollen 462
20.9 Laborausstattung und Reagenzien 462
20.9.1 Ausstattung 463
20.9.2 Reagenzienqualität und -Handhabung 463
20.10 Arbeitsvorschriften 463
20.10.1 Vorbereitungen 464
20.11 Probleme und Fehlerquellen 477
20.12 Literatur 479
20.13 Internetforen 480
20.14 Bücher 480
21. Tissue-Printing 481
21.1 Einführung 482
21.2 Generelle Methodik des Tissue-Printing 482
21.3 Tissue-Prints von zartem Gewebe mit Hilfe von Kryostatschnitten 483
21.4 Nachweise an Tissue-Prints 484
21.4.1 Western-Tissue-Print 484
21.4.2 Northern-Tissue-Print 486
21.4.3 Lokalisation von Enzymaktivität am Tissue-Print 487
21.5 Literatur 488
21.5.1 Originalartikel 488
21.5.2 Zusammenfassende Literatur 488
22. Reporterproteine 489
22.1 Einleitung 490
22.1.1 Enzymatische und lichterzeugende Reporter 490
22.1.2 Chemilumineszenz oder Fluoreszenz? 492
22.1.3 Zur Geschichte der FP 492
22.1.4 Grundlegendes zu fluoreszierenden Proteinen 492
22.2 Fluoreszierende Reporter in der Anwendung 495
22.2.1 Konstruktion geeigneter Expressionsvektoren 495
22.2.2 Transiente und stabile Genexpression 496
22.2.3 Analyse durch Fluoreszenzmikroskopie 497
22.3 Literatur 500
23. Qualitative und Quantitative Analyse in der Mikroskopie 501
23.1 Einleitung 502
23.2 Erstellung mikroskopischer Bilder 502
23.2.1 Digitale Kameras 502
23.2.2 Bilddarstellung bei digitalen Schwarz-Weiß- oder Farbkameras 503
23.2.3 Das Nyquist-Theorem 505
23.2.4 Verwendung des adäquaten Kameraadapters 505
23.2.5 Kalibrierung 506
23.2.6 Bildformate und Komprimierung 506
23.3 Bildanalyse 506
23.3.1 Konventionelle Verfahren zur Bildanalyse 506
23.3.2 Digitale Analyse 507
23.4 Automatisierte Experimentdurchführung mit motorisierten Mikroskopen 510
23.4.1 Motorische Komponenten 510
23.4.2 Mehrdimensionale Mikroskopie 511
23.4.3 Lebendzellmikroskopie 511
23.5 Ausgewählte Verfahren in der modernen Fluoreszenzmikroskopie 512
23.5.1 Quantifizierung von Fluoreszenzsignalen 512
23.5.2 Co-Lokalisation 513
23.5.3 Untersuchung der Proteindynamik in lebenden Zellen mit Hilfe fluoreszierender Proteine 514
23.5.4 FRET 516
23.5.5 Quantitative und qualitative Analyse des Fluoreszenzspektrums 517
23.5.6 Quantitative Analyse von Ionenkonzentrationen / Ratio Imaging 519
23.6 Bezugs- und Informationsquellen für Software und Analysemodule 520
23.7 Literatur 520
24. Morphometrie in der Mikroskopie: stereologische Methoden 521
24.1 Einführung 522
24.1.1 Warum Morphometrie? 522
24.1.2 Stereologie 522
24.2 Voraussetzungen 524
24.3 Methoden 525
24.3.1 Bestimmung des Referenzraumes 525
24.3.2 Probenauswahl (Sampling) 526
24.3.3 Ausgewählte Messungen 526
24.4 Literatur 529
25. Arbeitsschutz und Sicherheit im Labor 531
25.1 Einführung 532
25.2 Gefährdungsbeurteilung 532
25.3 Allgemeine Grundregeln 532
25.4 Sicherheitstechnische Laborausstattung 533
25.5 Notfalleinrichtungen 533
25.6 Persönliche Schutzausrüstung 533
25.7 Hautschutz/Hautschutzplan 534
25.8 Umgang mit Untersuchungsmaterial 534
25.9 Desinfektion 534
25.10 Gefahrstoffe 534
25.10.1 GHS (Global Harmonisiertes System) oder CLP (Classification, Labelling, Packaging) 534
25.10.2 Kennzeichnung von Gefahrstoffen 536
25.10.3 Aufbewahrung, Umgang und Transport von Gefahrstoffen 538
25.10.4 Aufnahmewege von Gefahrstoffen 540
25.10.5 Freisetzung von Gefahrstoffen 540
25.10.6 Gefahrstoffverzeichnis 540
25.10.7 Sicherheitsdatenblätter 541
25.10.8 Betriebsanweisung 541
25.10.9 Unterweisung 541
25.11 Umgang mit Laborabfällen 541
25.12 Umgang mit Mikrotommessern 541
25.13 Brandschutz 541
25.14 Infos zum Arbeitsschutz und GHS/CLP 543
25.15 Literatur 543
Anhang 1 544
Tabellen 545
Beispielhafte Programme für die Fixierung und Einbettung für die TEM im Einbettautomaten 572
Anhang 2 576
Aktuelle Bücher zu mikroskopischen Techniken 577
Anhang 3 580
Liste der Anleitungen 581
Index 587

Produkt-Details

• Erscheint lt. Verlag: 24.11.2015
• Zusatzinfo: XVIII, 603 S. 100 Abb. in Farbe.
• Verlagsort: Berlin
• Sprache: deutsch
• Themenwelt: Studium ► 1. Studienabschnitt (Vorklinik) ► Biochemie / Molekularbiologie
• Themenwelt: Naturwissenschaften ► Biologie ► Mikrobiologie / Immunologie
• Themenwelt: Technik ► Bauwesen
• Schlagworte: Histologie • Lichtmikroskopie • Mikroskopie • Mikroskopische Technik • Pathologie • Zellbiologie
• ISBN-10: 3-642-55190-4 / 3642551904
• ISBN-13: 978-3-642-55190-1 / 9783642551901